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Un vecteur pour sauter des étapes

jeudi 30 mai 2013

par Agnès Vernet

En permettant un clonage et une intégration simultanés, le vecteur pOSIP donne un coup d’accélérateur à l’ingénierie des procaryotes.

Véritables usines vivantes, les bactéries sont fréquemment modifiées pour produire des protéines d’intérêt. Bien que courante, cette opération nécessite plusieurs réactions et des contrôles à chaque étape. Pour simplifier l’ingénierie moléculaire mise en jeu, de nombreux protocoles ont été développés. Citons, par exemple, le système CRIM (conditional-replication, integration and modular), qui permet le clonage simultané de différentes séquences uniques grâce à des sites d’insertion dérivés du bactériophage lambda.
En se basant sur cette approche, des chercheurs des universités Stanford, aux États-Unis, et d’Adélaïde, en Australie, ont développé une méthode qui fusionne les étapes de clonage et d’intégration dans le chromosome procaryote. Cette « clonetegration » reprend les éléments d’insertion du plasmide CRIM et les associe au gène codant une intégrase au sein d’un seul vecteur : le « one-step integration plasmid » (pOSIP). L’étape de surexpression de la protéine d’intérêt dans un plasmide multicopie avant l’intégration dans le chromosome procaryote devient donc inutile. Il est ainsi facile de cloner des protéines létales pour l’hôte quand elles sont présentes en plusieurs copies. Sachant que l’ensemble du protocole ne demande pas plus d’une nuit et que le plasmide sera envoyé gratuitement pour tout projet de R&D, on peut prévoir un succès de laboratoire.

St-Pierre F. et al. (2013) ACS Synth Biol,
doi:10.1021/sb400021j

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